实验动物|使用Tonopen眼压计测量小鼠眼压——siRNA靶向下调 RhoA基因对慢性高眼压小鼠视功能的保护作用

2023-08-25 12:47
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仁山BeneMount动物医疗
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目的
探究 RNA干扰技术对青光眼视觉功能恢复的可行性。

方法
通过构建慢性高眼压小鼠模型并进行玻璃体腔注射 RhoAsiRNA(siRhoA)以干扰 RhoA的表达,分别采用闪光视觉诱发电位(f-VEP)、定量反转录聚合酶链反应 (qRT-PCR)和 Westernblot法对小鼠视觉功能、视网膜组织中 RhoA基因和 RhoA蛋白的表达情况进行检测。结果玻璃体腔注射后,siRhoA组小鼠患眼f-VEPP波、N波潜伏期和 P波振幅逐渐恢复,相较 NCsiRNA和 PBS组差异有统计 学意义(P<0.05),NCsiRNA和 PBS组小鼠患眼 f-VEP的 P波和 N波潜伏期延长,P波振幅降低(P<0.05)。此外, qRT-PCR和 Westernblot结果显示,经 siRhoA处理后,慢性高眼压模型小鼠患眼视网膜组织 RhoA基因和 RhoA蛋白表达量与对侧眼相比差异无统计学意义(P>0.05);而 NCsiRNA和 PBS组视网膜组织 RhoA基因和 RhoA蛋白表达量相较 对侧眼差异有统计学意义(P<0.05)。
实 验 动 物 模 型 建 立 与 分 组
实验动物饲养和使用遵守“眼与视觉研究协会动物使用声明”相关规定,经河南省立眼科医院中心伦理审查委员会通过 (HNEECA-2021-1)。实验动物模型拟采用既往实验建立的方法[10]。选取21只 4~6周的 C57小鼠(雌雄各半),随机分为 3组(A组,B组,C组)。3组小鼠 以 1 g· L-1 DEX 持续低浓度点左眼 (处理眼 ,DEX), 右眼接受生理盐水持续点眼(对照眼,NS)。使用 Tonopen 眼压计测量小鼠眼压 。 采用定量反转录聚合酶链反应(quantitative reverse transcription polymerase chainreaction,qRT-PCR)和 Westernblot检测第28天DEX处理眼和对照眼中 RhoA基因和 RhoA蛋白表达量。
图表
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结论

本研究构建了慢性高眼压模型小鼠,并通过 siRNA技术干扰了 RhoA的活 性,有效改善了青光眼模型小鼠视觉功能等,为基因途径治疗青光眼等疾病奠定了初步基础。

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